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小鼠避暗儀的實驗方法及注意事項

時間:2025-05-14 點擊:163次

小鼠避暗儀的實驗方法  
實驗準備  
熟悉環境:實驗前2天使小鼠熟悉實驗室環境,自由飲食、攝水。  
分組設計:按分層隨機區組設計,使各組動物平均體重和性別比例相似。實驗小鼠按訓練方法不同分為單次適應單次電擊(MOS)、單次適應限時訓練(MOL)、多次適應限時訓練(MUL)3組,每組根據給藥不同分為對照(C)和模型(M)兩個亞組,最后共6組(每組n=9)。  
儀器設置:避暗儀分為明、暗兩室,其間有一直徑為3cm的圓洞,兩室底部均鋪以銅柵。暗室底部銅柵可通電,電壓通過按鈕調節,一般為40V,50Hz。  
訓練方法  
MOS法:訓練在一天內完成,先將小鼠放入避暗儀中適應環境3min,訓練時將小鼠背對洞口放入明室內,其進入暗室受到電擊即取出。  
MOL法:訓練在一天內完成,小鼠適應環境3min,訓練3min。  
MUL法:連續3天在同一時間將小鼠放入避暗儀中適應3min,第三天適應完成后開始訓練,3min后取出。適應環境和訓練時任小鼠在明室和暗室之間自由穿梭,步入潛伏期大于3min者棄去不用。  
測試方法  
記錄指標:訓練完成24h后將小鼠再次放入明室,記錄其第一次進入暗室所需的時間,即步入潛伏期(STL)和5min內進入暗室的次數,即錯誤次數(ETs)。若5min內小鼠未進入暗室則STL記為300s,ETs記為0。  
注意事項  
實驗環境  
環境清理:實驗前后注意清理點擊柵欄動物排泄物,排泄物會影響通電性。通過酒精擦拭、晾干盡可能去除上一只動物氣味,儀器設備需具備通風系統。  
減少干擾:在實驗過程中必須保持所有實驗程序一致,如屏蔽噪音、減少氣味刺激、調節光線等,實驗環境應該安靜、昏暗,盡量輕巧抓取動物,減少對動物的刺激。關閉兩箱中間的門時要輕柔,不要制造過多外界的聲響影響動物行為。  
實驗操作  
動物適應:實驗開始前3-7天,每天抓取、輕撫動物,讓其適應被實驗人員抓取,避免實驗過程中因實驗人員抓取而造成動物處于應激狀態,造成實驗結果不可靠的問題。  
電擊參數:大鼠電流為0.65-1.8mA(推薦0.8mA),或電壓65-70V;小鼠電流為0.15-0.6mA(推薦0.25mA),或電壓30-36V,頻率為5-15Hz電流。  
設備維護:實驗儀器底部的銅柵容易生銹,導致電阻增加,每次實驗前,應以砂紙打磨光滑。

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